發(fā)酵飼料菌種配比篩選與發(fā)酵工藝優(yōu)化

2021-06-02 15:28:22 點擊：

摘要：試驗通過選擇枯草芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母菌和保加利亞乳桿菌作為混合發(fā)酵劑發(fā)酵全價飼料，可以進一步提高飼料利用率。在確定三種菌最佳混合比例的基礎(chǔ)上，對飼料發(fā)酵參數(shù)進行進一步優(yōu)化，探討鐵腳麻雞發(fā)酵飼料的最佳工藝，為提高養(yǎng)殖效益提供理論依據(jù)。

枯草芽孢桿菌是耗氧菌，發(fā)酵過程消耗大量的養(yǎng)分，維持厭氧的環(huán)境，促進厭氧菌乳酸菌生長，同時也抑制有害耗氧菌的生長；乳酸菌主要是產(chǎn)酸，對飼料質(zhì)量起到關(guān)鍵性作用；酵母菌是兼性厭氧菌，生長環(huán)境較寬，能產(chǎn)酸和大量的菌體蛋白。三種菌種的功效各不相同，采用三種菌種的最佳的混合配比，能夠讓其發(fā)酵的飼料營養(yǎng)更平衡、更利于吸收。

1 材料與方法

1.1 材料

酵母菌、乳酸桿菌和枯草芽孢桿菌；YPD、LB、MRS培養(yǎng)基、超凈工作臺、搖床培養(yǎng)箱、發(fā)酵菌種、配合飼料等試驗器材。

1.1.1 固體培養(yǎng)基

1）YPD固體每300mL水中蛋白胨、酵母粉、瓊脂糖、葡萄糖：6g、3g、6g、6g、6g單獨滅菌,然后加入300mL無菌蒸餾水中在121℃滅菌。

2）LB固體每300mL水中蛋白胨、酵母粉、氯化鈉：3g、1.5g、3g，在121℃滅菌鍋中滅菌。

3）MRS固體體培養(yǎng)基18.9g/300mL在121℃進行滅菌。

4）生理鹽水a(chǎn)c10.9%；Nacl:7.2g+800mL蒸餾水。

1.1.2 液體培養(yǎng)基

1）YPD液體。稱酵母浸膏1g加入80mL蒸餾水中溶解，葡萄糖2g加入20mL蒸餾水中溶解，分別滅菌溫度為121℃，后混合。

2）LB液體。酵母浸膏0.5g、蛋白胨1g、Nacl 1g，加無菌蒸餾水至100mL。

3）MBS液體。成品：5.224g/100mL加無菌蒸餾水，封口121℃無菌鍋滅菌。

1.2 試驗方法

滅菌：將配制YPD、LB、MRS培養(yǎng)基（固液），3個10mL離心管、100μL、1mL規(guī)格槍頭、無菌生理鹽水等進行滅菌；

分裝：打開無菌超凈工作臺,三個10mL離心管做好標記，分別加入YPD、LB、MRS液體培養(yǎng)基8mL；

接種：將酵母菌80μg、枯草芽孢桿菌80μL、乳酸桿菌80μL分別加入到含有對應(yīng)培養(yǎng)基的離心管中，并密封好；

培養(yǎng)：將酵母菌在28℃、15h、搖床培養(yǎng)、有氧，枯草芽孢桿菌：35℃、20h、搖床培養(yǎng)、有氧，乳酸桿菌：37℃、15h、靜置培養(yǎng)、無氧。

1.3 觀察與計數(shù)

培養(yǎng)時間到后，取出進行染色鑒定、計數(shù)。酵母菌用美蘭染色法，枯草芽孢桿菌及乳酸桿菌用革蘭氏染色法，染色結(jié)束后進行鏡鑒。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌種最佳配比濃度的篩選

2.1.1 平板菌落計數(shù)結(jié)果

本研究所使用的酵母菌在有氧條件下28℃搖床培養(yǎng)15h后進行菌落計數(shù)，枯草芽孢桿菌在有氧條件下35℃搖床培養(yǎng)20h后進行菌落計數(shù)，乳酸桿菌37℃靜置培養(yǎng)15h后進行菌落計數(shù)，原菌液的含菌量結(jié)果如表1所示。

2.1.2 菌種活化與濃度梯度配制

將三種菌的含菌量分別設(shè)三個水平（見表2），按L₉（3⁴）的正交表進行設(shè)計。最后將不同配比的三種菌按1%的接種量接種到飼料中，在常溫下進行為期7天的發(fā)酵。飼料水分含量為45%。具體接種方法為：將底料與菌種混勻后裝入500mL罐頭瓶中進行發(fā)酵，每個罐頭瓶裝發(fā)酵料200g，發(fā)酵完成后對發(fā)酵飼料的質(zhì)地、顏色、氣味等進行感官評定及菌落計數(shù)。

結(jié)合發(fā)酵飼料感官評定和活菌數(shù)測定結(jié)果，初步得出發(fā)酵用菌種配比為：酵母菌1.8×108cfu/mL、乳酸菌1.35×108cfu/mL、枯草芽孢桿菌4×1011cfu/mL。

2.2 混菌一次發(fā)酵參數(shù)的優(yōu)化結(jié)果

2.2.1 發(fā)酵工藝設(shè)置與優(yōu)化

本試驗先活化三種菌，分別獲取乳酸菌、酵母菌、枯草芽孢桿菌，將三種活化菌分別制配成最佳菌種配比為酵母菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌1.8×108、1.35×108、4×1011cfu/mL，在最佳菌種配比的條件下，以發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間、飼料水分、微生物接種量4個因素為考察因子，每個因素設(shè)3個水平，按L₉（3⁴）正交試驗表進行試驗設(shè)計，共9種組合，每種組合做3次重復(fù)，最后以活菌數(shù)做為評判指標。

2.2.2 活菌數(shù)的測定

稱取0.6ｇ發(fā)酵飼料至裝有5.4mL無菌生理鹽水的10mL離心管中，在振蕩器上充分震蕩30min，用滅菌吸管吸取10ml至滅菌空試管中，在漩渦混合器上震蕩 3min，然后吸取1mL加入到9ml無菌生理鹽水中，在漩渦混合器上混合1min，進行10倍系列釋，選取3個適當?shù)南♂尡稊?shù)，傾注平板，每個梯度做兩個平行，恒溫培養(yǎng)、計數(shù)，算出發(fā)酵飼料中的活菌數(shù)。發(fā)酵結(jié)束后，仔細觀察，可見發(fā)酵第五天飼料質(zhì)地松軟、顏色為黃色，香味淡香為最佳。通過對發(fā)酵飼料的質(zhì)地、顏色、氣味等進行感官評定及菌落計數(shù)，并進行常規(guī)養(yǎng)分的檢測，得出來水分含量為45%時，發(fā)酵的飼料比較好；溫度在25℃-30℃的時候發(fā)酵較好，此時產(chǎn)生的活菌數(shù)和活性物質(zhì)含量達到最優(yōu)。

3 結(jié)論

綜上所述，最佳菌種配比為酵母菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌1.8×108、1.35×108、4×1011cfu/mL；鐵腳麻雞育肥期飼料發(fā)酵最佳工藝為發(fā)酵溫度為25-30℃，發(fā)酵時間為5天，飼料含水量為45%。

【視頻】部分發(fā)酵飼料養(yǎng)豬雞鴨帶給你無臭味健康無抗養(yǎng)殖效果

廣西助農(nóng)畜牧科技有限公司提供全方位支撐

2020年已全面禁抗，我們之前經(jīng)常在飼料中添加的抗生素進行促生長行為將是違法，否則面臨巨額罰單。如何既能夠促進動物生長又能夠形成無抗養(yǎng)殖呢？其實中草藥在促進畜禽養(yǎng)殖健康和生長、改善肉蛋奶品質(zhì)大有可為，特別是將中草藥發(fā)酵后效果提升4-28倍等好處，這個實施方案比你想象中效果更好，運用的沒有不被效果折服的，值得嘗試驗證

我們的技術(shù)僅需在出欄前半個月左右運用益生菌+酶制劑+中草藥相關(guān)的無違禁安全產(chǎn)品，肉質(zhì)改善非常顯著，且可以批量化生產(chǎn)。

目前我們已經(jīng)有了成熟的技術(shù)、產(chǎn)品和運用方案，且有大量成功案例，可以在短時間、批量化、安全無違禁地為您的養(yǎng)殖場生產(chǎn)出高品質(zhì)的家畜、家禽、水產(chǎn)產(chǎn)品。

規(guī)模養(yǎng)殖場養(yǎng)殖公司我們提供產(chǎn)品樣品、驗證效果和通過檢測后您再放心地規(guī)模化運用。

微信公眾號：gxzn-99

微信號：gxzn07713815862

電話：0771-2204816，3800156,3815862

網(wǎng)站：m.fsssmj.com， www.zn99.com

淘寶店：gxzn99.taobao.com

微店：weidian.com/?userid=1353707843

產(chǎn)品購買微信轉(zhuǎn)賬請?zhí)砑?8076549930或15578100088為好友（還可以咨詢技術(shù)與業(yè)務(wù)問題）