摘要:本試驗(yàn)旨在研究添加不同比例益生菌發(fā)酵棉粕對(duì)黃羽肉雞小腸黏膜形態(tài)、血清T淋巴細(xì)胞業(yè)群及腸道菌群的影響。選用14日齡健康黃羽肉雞320只.隨機(jī)分成4組,每組4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)20只雞。I組為空白對(duì)照組。II .I.V組分別添加3% .6%和9%發(fā)酵棉粕,研究不同添加址對(duì)肉雞生長(zhǎng)前期(14~28 I齡)、中期(29~45 H齡)、后期(46~65口齡)各階段小腸黏膜形態(tài).中、后期血清T淋巴細(xì)胞亞群及后期腸道菌群的影響。研究結(jié)果顯示:①與I組相比.組黃羽肉雞前、中、后期的十二指腸絨毛高度極顯著提高31. 90%、25. 17%.49. 41%(P<0.01).隱窩深度極顯著降低9. 42%、11.31%、10.83%(P<0.01),V/C極顯著提高45. 65%.41.19%、67. 84%(P<0.01);空腸絨毛高度極顯著提高28. 72% .28. 38% .27.61% .(P<0.01),隱窩深度顯著或極顯著下降6. 65%(P<0.05).6. 18%(P<0.01).7.37%(P<0.01).V/C極顯著提高37.84%、36. 69%、37. 82%(P<0.01):回腸絨毛高度極顯著提高76. 64%,40.36% .67. 20%(P<0.01)，隱深度顯著降低4. 09%、6.07%.6.02%(P<0.05).V/C極顯著提高83. 79%、49. 27%.78.26% (P<0. 01)。②中、后期組黃羽肉雞CD4+ /CD8~顯著提高42.86%,34.95%(P<0.05)。③隨著發(fā)酵棉粕添加量的增多.黃羽肉雞的十二:指腸.空腸、回腸中乳酸菌的數(shù)量逐漸增多.且差異越來(lái)越明顯.除1組十二指腸和空腸段外,其余各組的各腸段差異均顯著或極顯著(P<0.05;P<0.01)。大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量逐漸減少.H差異越米越明顯.除口組十二指腸段外,其余各組各腸段差異均顯著或極顯著(P<0.05;P<0.01)。綜上所述.6%發(fā)酵棉粕組在提高十二指腸、空腸、回腸絨毛高度.V/C,降低其隱窩深度方面都優(yōu)于3% .9%發(fā)酵棉粕組,而9%發(fā)酵棉柏組在提高CD4“/CD8”、腸道乳酸菌數(shù)量和降低大腸桿菌和沙門(mén)氏菌數(shù)量方面優(yōu)于3%.6%發(fā)酵棉粕組。

關(guān)鍵詞:黃羽肉雞;小腸黏膜形態(tài);血清T淋巴細(xì)胞亞群:腸道菌群

隨著畜牧業(yè)的迅猛發(fā)展,人畜爭(zhēng)糧矛盾日益突出，蛋白飼料資源出現(xiàn)了嚴(yán)重的短缺,棉籽餅粕富含蛋白質(zhì),是很好的動(dòng)物飼料蛋白質(zhì)源,因而備受關(guān)注。但因游離棉酚含量高，使其作為飼料使用受到了極大的限制,采用物理.化學(xué)或生物學(xué)方法對(duì)棉粕進(jìn)行處理可降解棉酚，尤以對(duì)棉粕進(jìn)行發(fā)酵處理最為高效。發(fā)酵棉粕不僅可替代部分魚(yú)粉、豆粕,降低飼料生產(chǎn)成本,且發(fā)酵棉粕中的益生菌既能在數(shù)量又能在種類上.補(bǔ)充動(dòng)物消化道內(nèi)缺少的正常微生物,調(diào)整和維持消化道微生態(tài)平衡，促進(jìn)乳酸菌、雙歧桿菌等有益菌的增殖.抑制大腸桿菌、沙門(mén)氏菌等致病菌的生長(zhǎng),提高機(jī)體免疫力,而且可以與有益微生物產(chǎn)生的各種消化酶協(xié)同作用.降解飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子,提高飼料利用率,進(jìn)而提高動(dòng)物的免疫性能.促進(jìn)消化道微生態(tài)平衡。目前關(guān)于發(fā)酵棉粕的研究多集中在脫毒效果及飼料營(yíng)養(yǎng)成分變化方面，在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用則多集中在生產(chǎn)性能方面，而在動(dòng)物腸道微形態(tài).血清T淋巴細(xì)胞亞群和腸道菌群方面的研究基本沒(méi)有。本試驗(yàn)通過(guò)在日糧中添加不同比例益生菌發(fā)酵棉粕研究其對(duì)黃羽肉雞小腸黏膜形態(tài).血清T淋巴細(xì)胞亞群及腸道菌群的影響。

1、材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物及分組選擇體質(zhì)健康、體重相近的14日齡商品代黃羽肉雞320只。采用單因素多水平試驗(yàn)設(shè)計(jì),將試驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成4組,每組分4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)20只。I組為空白對(duì)照組，II .I、IN組分別添加3%、6%和9%益生菌發(fā)酵棉粕。各飼喂時(shí)期分別為:前期(14~28日齡)、中期(29 ~45日齡)、后期(46~65日齡)。試驗(yàn)采用代謝籠分欄飼養(yǎng),自由采食，自由飲水,并嚴(yán)格按照飼養(yǎng)管理制度進(jìn)行飼養(yǎng)管理。試驗(yàn)在試驗(yàn)雞場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)雞場(chǎng)提供。

1.2益生菌發(fā)酵棉粕試驗(yàn)用益生菌發(fā)酵棉粕,由酵母菌、芽孢桿菌和乳酸菌混合益生菌發(fā)酵棉粕而成。

1.3試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平黃州肉雞試驗(yàn)日糧由玉米、大豆粕、棉籽粕、菜籽粕、玉米蛋白質(zhì)粉等原料,參照1994年NRC的《家禽營(yíng)養(yǎng)需要量》由按要求配制。日糧的配制選用常規(guī)的飼料原料.各飼喂時(shí)期的日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.4試劑與儀器腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂.MRS瓊脂、SS瓊脂:雞淋巴細(xì)胞分層液、小鼠抗一雞CD3-FITC(規(guī)格0.5 mg)、小鼠抗一雞CD4 PE(規(guī)格0. 1 mg)、小鼠抗-雞CD8a-PE(規(guī)格0.1 mg)均;1%伊紅、蘇木精染色液為自配。PAS型流式細(xì)胞儀;LeicaRM2235旋轉(zhuǎn)切片機(jī)、KD-T電腦生物組織烤攤片機(jī)。

1.5 樣品采集與分析測(cè)定

1.5.1樣品采集①血樣采集:分別于45和65日齡10: 00從每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1只體重接近平均體重的試驗(yàn)雞,用加有肝素抗凝劑的采血管心臟采全血2 mL,送至石河子大學(xué)第二附屬醫(yī)院,進(jìn)行血清T細(xì)胞亞型檢測(cè)(所有血樣必須在8 h內(nèi)檢測(cè)完),采血前空腹10 h,停料不停水。②腸段采集: 分別于28.45和65日齡10:00從每組隨機(jī)選取4只體重接近平均體重的試驗(yàn)雞，靜脈放血.解剖,清理出腸段.切取2~3cm十二指腸、空腸、回腸,盡量切取各腸的中間段，每段腸兩份。一份用生理鹽水清潔切口、污物.結(jié)扎.用于腸道菌群培養(yǎng);另一份用生理鹽水盡量清理干凈腸段污物.編號(hào),置于10%甲醛溶液中保存,用于腸道組織切片的制作。.

1.5.2 分析測(cè)定

1.5.2.1 石蠟切片制作與顯微測(cè)量 先脫水、透明,接著進(jìn)行透蠟、包埋和修塊,然后切片、貼片、展片與烤片.隨后經(jīng)過(guò)脫蠟、染色和封片.最后觀察測(cè)量,并用Leica專用萬(wàn)能顯微鏡數(shù)碼拍照,光鏡下用Photoshop軟件處理,測(cè)定絨毛高度(VH)、隱窩深度(CD)。每個(gè)樣品觀察6個(gè)非連續(xù)性5~10 μm的縱切片,每張縱切片測(cè)定5~10個(gè)絨毛高度和隱窩深度。絨毛高度以腸腺開(kāi)口至絨毛頂端的垂直高度為準(zhǔn)，隱窩深度以黏膜肌層至腸腺開(kāi)口處的垂直高度為準(zhǔn)。

1.5.2.2T細(xì)胞亞型檢測(cè)①先取2mL.淋巴細(xì)胞分離液于試管中,再取2 mI. 全血沿管壁慢慢加

于淋巴細(xì)胞分離液上,3000 r/min,離心15 min.②. 用吸管吸取白細(xì)胞層(淋巴細(xì)胞層)，加PBS液混勻,800 r/min,離心10 min,連續(xù)操作2次。③將細(xì). 胞配成(1~2)X 10"個(gè)/mL.按說(shuō)明進(jìn)行CD3-FITC/CD4-PE、CD3-FITC/ CD8a-PE染色，上機(jī)，進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)，計(jì)數(shù)2X10'個(gè)。檢測(cè)CD3*T細(xì)胞占圈門(mén)細(xì)胞的百分含量和CD4"、CD8*占CD3'T細(xì)胞的百分含量。④用CEELLQUEST軟件分析和處理流式細(xì)胞儀上獲取的數(shù)據(jù)。

1.5.2.3 菌群培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)中，立即取腸道內(nèi)容物1 g,放人無(wú)菌試管中,加入無(wú)菌生理鹽水9 mL,在磁力震蕩器震蕩3~5 min,此液為10~稀釋液,再依次進(jìn)行倍比稀釋,分別將不同腸段適當(dāng)?shù)?個(gè)稀釋度的100μl.稀釋液涂于各自相應(yīng)鑒別培養(yǎng)基上培養(yǎng),每個(gè)稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù),待培養(yǎng)完畢后，根據(jù)菌群細(xì)胞形態(tài)、大小,選擇菌落數(shù)在5~150個(gè)之間的進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果用每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個(gè)數(shù)的對(duì)數(shù)(log CFU/g)表示。

1.6 數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel軟件整理，SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件()ne- Way ANOVA進(jìn)行方差分析,LSD法進(jìn)行組間差異顯著性檢驗(yàn),試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2、結(jié)果與分析

2.1 益生菌發(fā)酵棉粕對(duì)黃羽肉雞小腸黏膜形態(tài)的影響.

2.1.1益生菌發(fā)酵棉粕對(duì)前期黃羽 肉雞小腸黏膜形態(tài)的影響由表2可知，就十二指腸絨毛高度而言,I1、IV組較I組分別極顯著提高9. 12%、31. 90%、15.92%(P<0.01)。II 、I、IV組十二指腸隱窩深度分別比I組極顯著降低4. 18%、9. 42%.3. 56%(P<0.01)。IIII、IN組十二指腸絨毛高度與隱窩深度(V/C)的比值較I組分別極顯. 著提高13.88.45.65%、20.24%(P<0.01)。與I組相比，0、IV組空腸絨毛高度分別極顯著提高28.72%、15.13%(P

2.1.2益生菌發(fā)酵棉粕對(duì)中期黃羽肉雞小腸黏膜形態(tài)的影響

由表3可知,就十二指腸絨毛高度而言，III、IV組較I組分別極顯著提高11. 22%、25. 17%、24.54%(P<0.01);與I組相比，I、IV組十二指腸隱窩深度分別極顯著降低6. 31%、11. 31% .5.57%(P<0.01);十二指腸絨毛高度與隱窩深度(V/C)的比值分別極顯著提高18. 76%、41. 19% .31.81%(P<0.01)。較I組而言，1、II、NV組空腸絨毛高度分別極顯著提高9. 36%、28. 38%、16. 88%(P<0.01);I1、V組空腸隱窩深

度分別降低2. 94% .2. 35%(P>0.05),叫組則極顯著降低6.18%(P<0.01);Il、I、IV組空腸絨毛高20.47%、40. 36% .37. 96%(P<0.01),回腸隱窩深度分別顯著降低5.41%、6.07%、4. 80% (P<0.05).回腸絨毛高度與隱窩深度的比值(V/C)分別極顯著提高27.67%、49.27% .44.90%(P<0.01)。

2. 1.3 益生菌發(fā)酵棉粕對(duì)后期黃羽肉雞小腸黏膜形態(tài)的影響

由表 4↓可知，就十二指腸絨毛高度而言.II、IV組較1組分別極顯著提高30. 18%、49.41% ,36.73%(P<0.01);與1組相比，I1、IV組十二指腸隱窩深度分別極顯著降低5. 78%、10. 83%、5.19%(P<0.01).十二指腸絨毛高度與隱窩深度(V/C)的比值分別極顯著提高38. 01%、67. 84%.44. 15%(P<0.01)。較I組而言，川、I組空腸絨毛高度分別極顯著提高27.61%、13. 39 %(P<0.01), I組顯著提高5. 23%(P

2.2益生菌發(fā)酵棉粕對(duì)黃羽肉雞血清CD4~/CD8’比例的影響

由表5可知，中期IN組的CD4' /CD8"較I組提高42. 86%(P<0.05),高于其他各組.說(shuō)明IN組的健康狀況優(yōu)于其他各組.抗應(yīng)激能力最強(qiáng)。后期I組的CD4' /CD8'與I組相比提高34.95%(P<0.05),高于其他各組，說(shuō)明N組的健康狀況最佳，免疫能力最好。同一時(shí)期,隨著益. 生菌發(fā)酵棉粕添加量的增多,CD4~ /CD8'逐漸升高，說(shuō)明黃羽肉雞的抗應(yīng)激能力在逐漸增強(qiáng)，且各試驗(yàn)組后期CD4~ /CD8"均較前期有所提高,表明黃羽肉雞后期的抗應(yīng)激能力在增強(qiáng),健康狀況在提高。

2.3 益生菌發(fā)酵棉粕對(duì)黃羽肉雞腸道菌群的影響

由表6可知，隨著益生菌發(fā)酵棉粕添加量的增多，黃羽肉雞的十二指腸、空腸、回腸中的乳酸菌的數(shù)量逐漸增多,試驗(yàn)組較對(duì)照組差異越來(lái)越明顯,除3%益生菌發(fā)酵棉粕組十二指腸和空腸段的乳酸菌與對(duì)照組相比差異不顯著，其余齊組的各腸段較對(duì)照組差異均顯著或極顯著(P<0.05;P<0.01)。隨著益生菌發(fā)酵棉粕添加量的增多.黃羽肉雞的十二指腸. 空腸、回腸中的大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量逐漸減少,試驗(yàn)組較對(duì)照組差異越來(lái)越明顯.除3%益生菌發(fā)酵棉柏組十二指腸段的大腸桿菌與對(duì)照組相比差異不顯著,其余各組的各腸段較對(duì)照組差異均顯著或極顯著(P<0.05;P<0.01)。

3、討論

3.1 益生菌發(fā)酵棉粕對(duì)黃羽肉雞小腸黏膜形態(tài)的影響

小腸是動(dòng)物消化吸收的主要場(chǎng)所.腸道黏膜結(jié)構(gòu)與小腸消化吸收功能常切相關(guān)。小腸絨毛是小腸的最主要黏膜結(jié)構(gòu)。是動(dòng)物消化和吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的特有結(jié)構(gòu),小腸的長(zhǎng)度、寬度及隱窩深度直接影響小腸的吸收面積。絨毛高度與絨毛上皮細(xì)胞數(shù)量呈顯著正相關(guān)，只有成熟的絨毛細(xì)胞才具有吸收養(yǎng)分的功能。因此,絨毛增高時(shí).成熟細(xì)胞增多,養(yǎng)分吸收能力增強(qiáng)。隱窩深度反映了細(xì)胞生成率,隱窩變淺，表明細(xì)胞成熟率上升,分泌功能增強(qiáng)。V/C綜合反映小腸絨毛吸收功能，當(dāng)V/C減小時(shí)，說(shuō)明絨毛對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力減弱。11常伴隨腹瀉的發(fā)生。當(dāng)V/C增大時(shí)，說(shuō)明絨毛對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力增強(qiáng),消化吸收功能增強(qiáng)，腹瀉率也下降。指出,小腸是消化道中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收和運(yùn)輸?shù)淖钪饕课唬∧c絨毛的主要功能是吸收,絨毛上皮細(xì)胞是消化吸收的功能細(xì)胞,腸腺的主要功能是分泌，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收非常有利。因此.良好的小腸黏膜結(jié)構(gòu)是養(yǎng)分消化吸收和動(dòng)物正常生長(zhǎng)的生理學(xué)基礎(chǔ)。絨毛高度與隱窩深度反映了腸道的功能狀態(tài).隱窩深度的增加表明絨毛上皮成熟細(xì)胞減少。試驗(yàn)結(jié)果表明,日糧中添加益生菌發(fā)酵棉粕均可顯著或極顯著提高十二指腸.空腸、回腸絨毛高度，顯著或極顯著降低十二指腸、空腸、回腸隱窩深度,顯著或極顯著提高其絨毛高度與隱窩深度的比值。說(shuō)明益生菌發(fā)酵棉粕可以改善黃羽肉雞健康狀況.增強(qiáng)免疫能力，這與研究結(jié)果相一致。

3.2 益生菌發(fā)酵棉粕對(duì)黃羽肉雞血清T淋巴細(xì)胞CD4' /CD8'的影響

T 淋巴細(xì)胞CD4' .CD8'亞群百分含量或濃度與動(dòng)物機(jī)體的免疫防御密切相關(guān)。CD4- /CD8'比例高則機(jī)體自身免疫功能相對(duì)強(qiáng)，低則相反(劉小剛等.2010)。目前,對(duì)淋巴細(xì)胞業(yè)群的研究多集中在某些中藥有效成分或寡糖成分: 對(duì)CD4'和CD8" T淋巴細(xì)胞的影響,但效果多不一致。CD4'是T細(xì)胞輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞的標(biāo)志,具有使輔助T細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)樾?yīng)T細(xì)胞及B細(xì)胞生產(chǎn)抗體和|i噬細(xì)胞活化等功能;CD8 '是抑制性T細(xì)胞的標(biāo)志，可以抑制免疫細(xì)胞的功能.維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性。CD4' 和CD8*細(xì)胞都是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的樞紐,是反映機(jī)體細(xì)胞免疫的非特異性免疫學(xué)指標(biāo)。它們的穩(wěn)定是維持機(jī)體正常免疫功能所必需的,一般情況下，以CD4'和CD4 : /CD8'比值的高低.作為衡量機(jī)體免疫狀態(tài)高低的依據(jù)。在黃羽肉雞日糧中添加補(bǔ)益類中草藥提取物可顯著提高28和56日. 齡黃羽肉雞CD4"/CD8'比值.使用中藥敵克素也可顯著提高CD4' /CD8*比值。給斷奶仔豬加谷氨酰胺二肽,證實(shí)谷氨酰胺二肽可以提高仔豬斷奶第10天的CD4'T細(xì)胞百分含量,降低CD8* T細(xì)胞百分含量,并提高斷奶第10和21天的CD4 "/CD8'。給不同免疫狀態(tài)雛雞添加米糠多糖,驗(yàn)證了米糠多糖能夠提高雛雞CD4+ T淋巴細(xì)胞比例,但對(duì)CD8* T淋巴細(xì)胞作用不明顯。給球蟲(chóng)感染雞注射牛膝皂甘,結(jié)果發(fā)現(xiàn)牛膝皂甘能夠促進(jìn)球蟲(chóng)免疫雞的免疫機(jī)能狀態(tài)。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn).9%益生菌發(fā)酵棉粕可顯著提高CD4 /CD8 ”.由此可見(jiàn).益生菌發(fā)酵棉粕能夠提高機(jī)體的正向免疫調(diào)節(jié).從而起到增強(qiáng)黃羽肉雞的細(xì)胞免疫水平。機(jī)制可能是由于添加益生菌發(fā)酵棉粕飼料在發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的小分子物質(zhì)(如寡糖類成分)或小肽(如谷氨酰胺二肽)的免疫調(diào)節(jié)作用.具體原因還有待進(jìn)-步的深入研究。

3.3益生菌發(fā)酵棉粕對(duì)黃羽肉 雞腸道菌群的影響

動(dòng)物剛出生時(shí).腸道內(nèi)基本上.無(wú)菌.此時(shí),若能及時(shí)提供優(yōu)良菌群可以搶先占領(lǐng)動(dòng)物腸道.對(duì)動(dòng)物以后的健康起巨大作用。在動(dòng)物生長(zhǎng)后期.腸道功能進(jìn)一步完善.此時(shí).在H糧中若再添加微生:物制劑可以起到補(bǔ)充、完善腸道有益菌群平衡、保證健康等作用。

芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌是保證動(dòng)物消化道健康的重要菌群,乳酸菌通過(guò)產(chǎn)乳酸降低腸道pH. 有效抑制致病大腸桿菌、沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng).芽孢桿菌酵母菌通過(guò)有氧呼吸,大量消耗腸道中有限的游離氧,造成腸道中游離氧更加稀薄.此舉嚴(yán)重抑制了致病大腸桿菌、沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)與繁殖,同時(shí)也促進(jìn)了乳酸菌的生長(zhǎng).維持了腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡.這也. 所認(rèn)同,并與其試驗(yàn)結(jié)果-致，在肉鵝日糧中添加纖維素酶顯著提. 高乳酸桿菌數(shù)量.減少官腸內(nèi)容物中的大腸桿菌的數(shù)量的報(bào)道一致。報(bào)道寡糖不僅有益

菌生長(zhǎng)抑制有害菌繁殖.還可促進(jìn)各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用等。大腸桿菌本是動(dòng)物腸道的正常菌群，是動(dòng)物體不可或缺的細(xì)菌,但某些能致病的菌株往往引起各種疾病,給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)重大的經(jīng)濟(jì)損失。在肉仔雞日糧中添加0. 4%益生索，顯著提高了乳酸菌的數(shù)量，表明黃羽肉雞日I糧中加人益生素有助于乳酸菌的生長(zhǎng)繁殖,這些均與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致。在本試驗(yàn)中9%益生菌發(fā)酵棉粕可極顯著提高十二指腸、空腸、回腸的乳酸菌的數(shù)量.極顯著降低十二指腸、空腸、回腸的大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量。可能是經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵.產(chǎn)生的一些中間產(chǎn)物(如肽類、氨基酸、低聚糖等)促進(jìn)了有益微生物混合菌的生長(zhǎng),許多試驗(yàn)結(jié)果表明.大多數(shù)低聚糖可作為腸道有益菌(如雙歧桿菌、乳酸菌等的碳源),梭狀芽孢桿菌、真桿菌.腸桿菌或大腸桿菌、沙門(mén)氏菌等有害菌卻不能利用或利用率極低。

研究結(jié)果表明.在育肥豬H糧中添加芽孢桿菌，腸道中芽孢桿菌、雙歧桿菌、乳酸菌數(shù)量顯著增加，而大腸桿菌的數(shù)量顯著減少。指出.合生素可以增加肉雞腸道中乳酸菌數(shù)時(shí),但顯著抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖。以上:研究結(jié)果表明,益生菌發(fā)酵棉粕中的有益微生物能促進(jìn)腸道自身或外源有益菌在腸道內(nèi)生長(zhǎng)與定植.抑制有害菌生長(zhǎng).從而使動(dòng)物建立起iE常腸道微生物區(qū)系。促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，這與報(bào)道結(jié)果相一致。

4、結(jié)論.

益生菌發(fā)酵棉粕可顯著提高十二指腸、空腸.問(wèn)腸絨毛高度.隱窩深度則不同程度的降低.各腸段絨毛高度/隱窩深度值均顯著或極顯著提高,顯著提高各試驗(yàn)組黃羽肉雞免疫能力,以添加6%益生菌發(fā)酵棉粕試驗(yàn)效果最好。益生菌發(fā)酵棉粕可顯著提高十二指腸、空腸、問(wèn)腸的乳酸菌的數(shù)量,顯著降低大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的數(shù)量.添加9%益生菌發(fā)酵棉粕效果最為明顯。

實(shí)戰(zhàn)操作技術(shù)——棉菜籽餅脫毒變身優(yōu)質(zhì)飼料替代豆粕操作新技術(shù)

當(dāng)前豆粕價(jià)格很高有些地方貨源緊缺，而棉菜籽餅（棉籽粕、菜籽粕）價(jià)格相對(duì)便宜，棉菜籽餅是棉子、油菜籽榨油后剩下的餅狀殘?jiān)鞍踪|(zhì)含量較高，含有各種氨基酸成分。但由于棉菜籽餅中含有植酸、芥子堿等物質(zhì)，這些物質(zhì)含有一定的毒性，還會(huì)影響動(dòng)物的消化吸收，不能大量使用，因此不建議直接飼喂給動(dòng)物！

現(xiàn)在通過(guò)微生物飼料發(fā)酵劑的除毒脫毒技術(shù)，可以成功將菜籽餅變?yōu)閮?yōu)質(zhì)添加飼料，直接按照1公斤發(fā)酵的棉菜籽餅（發(fā)酵前的重量）代替約0.85公斤豆粕進(jìn)行使用。飼料發(fā)酵劑中的有益微生物，在發(fā)酵過(guò)程中分泌的代謝產(chǎn)物，可將棉菜籽餅中的毒性物質(zhì)等有效分解。

豆粕、菜粕、棉粕成分對(duì)比

1.豆粕是一種高蛋白原料，無(wú)需脫毒即可用作飼料。其中蛋白質(zhì)含量為40%-48%，賴氨酸含量為2.5%-3.0%，色氨酸含量為0.6%-0.7%，蛋氨酸含量為0.5%-0.7%。2020年11月12日?qǐng)?bào)價(jià)每噸在3500元左右。

2.菜粕的粗蛋白含量在34%-38%之間，特點(diǎn)是蛋氨酸含量高（僅次于芝麻餅、粕），賴氨酸含量亦高。而精氨酸含量低，是餅、粕飼料中含量最低的。菜籽粕的有效能值偏低（淀粉含量低、菜籽殼難以消化利用）。礦物質(zhì)中，鈣和磷的含量均高，硒和錳的含量亦高。特別是硒的含量是常用植物飼料中最高的。2020年11月12日?qǐng)?bào)價(jià)每噸在2900元左右。

3.棉粕蛋白質(zhì)含量一般為44.32%，僅次于豆粕的蛋白質(zhì)含量48%，而高于菜籽粕的蛋白質(zhì)含量36.04%。精氨酸含量高達(dá)3.6%-3.8%，而賴氨酸含量?jī)H有1.3%-l.5%，只有豆粕的一半。2020年11月12日?qǐng)?bào)價(jià)每噸在3000元左右。

是否需要脫毒處理

1.豆粕無(wú)需經(jīng)過(guò)脫毒即可用作飼料。而且豆粕中富含蛋白質(zhì)和多種氨基酸，在不需要額外加入動(dòng)物性蛋白的情況下，僅豆粕中含有的蛋白質(zhì)和氨基酸足以平衡家禽和豬的食譜，促進(jìn)它們的營(yíng)養(yǎng)吸收。只有當(dāng)其他粕類單位蛋白成本遠(yuǎn)低于豆粕時(shí)，豆粕才有可能被替代。

2.菜粕菜籽中含有硫葡萄糖苷、芥酸、單寧、皂角苷等不良成分，其中主要是硫葡萄糖苷。硫葡萄糖苷本身無(wú)毒，但在一定溫度和水分條件下，經(jīng)過(guò)菜籽本身含有的芥子酶的酶解作用而產(chǎn)生異硫氰酸酯、唑烷硫酮和腈類等有害物質(zhì)。這些物質(zhì)可引起甲狀腺腫大，從而造成動(dòng)物生長(zhǎng)速度下降，繁殖力減退。單寧則妨礙蛋白質(zhì)的消化，降低適口性。而芥酸阻撓脂肪代謝，造成心臟脂肪蓄積及生長(zhǎng)受到抑制。。使用前需進(jìn)行一定的脫毒處理，并且使用時(shí)要加以限制，具體喂量應(yīng)根據(jù)菜粕中有害成分含量而定。經(jīng)過(guò)脫毒處理的菜籽粕喂量可以加大，而“雙低”油菜籽生產(chǎn)的菜粕喂量要受限制。同時(shí)，應(yīng)結(jié)合菜粕的氨基酸組成特點(diǎn)，適當(dāng)搭配其它餅粕。

3.棉籽中含有對(duì)動(dòng)物有害的棉酚及環(huán)丙烯脂肪酸，尤其是棉酚的危害很大。在制油過(guò)程中，由于蒸炒，壓榨等熱作用，大部分棉酚與蛋白質(zhì)、氨基酸結(jié)合而變成結(jié)合棉酚，結(jié)合棉酚在動(dòng)物消化道內(nèi)不被動(dòng)物吸收，故毒性很小。另一部分棉酚則以游離形式存在于餅、粕及油品中，這部分游離棉酚對(duì)動(dòng)物毒性較大，尤其單胃動(dòng)物過(guò)量攝取或攝取時(shí)間較長(zhǎng)，可導(dǎo)致生長(zhǎng)遲緩、繁殖性能及生產(chǎn)性能下降，甚至導(dǎo)致死亡。幼小動(dòng)物對(duì)棉酚的耐受能力更低。由于棉籽餅、粕中游離棉酚對(duì)動(dòng)物有害，因此，在使用棉餅、粕時(shí)，要根據(jù)飼喂對(duì)象及餅粕中游離棉酚的含量加以限量。反芻家畜在有優(yōu)質(zhì)粗料及多汁青料的情況下，棉籽餅、粕的用量不受限制，不會(huì)造成中毒。對(duì)單胃動(dòng)物要限制喂量，最好使用經(jīng)過(guò)脫毒處理的棉籽餅粕。同時(shí)，使用棉籽餅、粕配制飼糧要注意氨基酸平衡，尤其是棉籽餅、粕的賴氨酸含量低，且利用率差，應(yīng)注意添加賴氨酸。

發(fā)酵操作技術(shù)

發(fā)酵棉菜籽餅其實(shí)也是一個(gè)脫毒技術(shù)，具體操作如下：

1.仔細(xì)檢查棉菜籽餅，剔除棉菜籽餅中嚴(yán)重變質(zhì)發(fā)霉的部分，輕度發(fā)霉的原料可以忽略，因?yàn)槲⑸锇l(fā)酵能夠脫霉。

2.將棉菜籽餅粉碎并添加適量的玉米粉淀粉類的能量飼料等，調(diào)節(jié)飼料營(yíng)養(yǎng)比例。

3.每噸棉菜籽餅加入2公斤食鹽、玉米粉（其它淀粉、面粉次粉等也可以，或者粉碎的生紅薯300公斤也可以）100公斤、“99多功能飼料發(fā)酵劑”1包（500g/包，市場(chǎng)售價(jià)約25元，以高濃度乳酸菌、酵母菌、復(fù)合酶制劑的專業(yè)發(fā)酵劑）。

4.在混合物料中添加適量水分，使混合物料含水量保持在55%左右，以“手抓一把并緊握，無(wú)水滴落，松手后輕觸即散”為宜，一般上述配方中需要加入清水約500-600公斤。

5.發(fā)酵方式根據(jù)實(shí)際環(huán)境條件各異，在桶、缸、塑料袋等容器中發(fā)酵均可。

6.發(fā)酵時(shí)要盡可能排盡空氣進(jìn)行密封發(fā)酵。如果使用的發(fā)酵容器有密封不嚴(yán)實(shí)的隱患，要在一開(kāi)始就在其外層包裹一層塑料袋并扎緊。發(fā)酵過(guò)程中不能啟封。

7.發(fā)酵時(shí)間受環(huán)境溫度影響，通常夏季發(fā)酵2-3天，冬季發(fā)酵5-7天即可完成。發(fā)酵完成后，有較為強(qiáng)烈的酸香味，ph值在3-4。

規(guī)模運(yùn)用混合發(fā)酵現(xiàn)場(chǎng)

塑料缸、飼料袋（有內(nèi)膜）均可做發(fā)酵飼料

采用池子發(fā)酵

發(fā)酵完成的棉菜粕飼喂動(dòng)物技術(shù)

需要注意的是，發(fā)酵后的飼料酸度較低，不可以取代禽畜全部日糧。其他類發(fā)酵飼料同理。飼喂時(shí)根據(jù)不同情況，將發(fā)酵飼料按照一定比例添加到日糧中，發(fā)酵完成的棉菜粕為濕料，具體使用量每大概1.5-2公斤發(fā)酵棉菜粕（濕料）代替動(dòng)物日糧配方中1公斤豆粕的使用量進(jìn)行代替使用，與其它飼料混合后直接飼喂，由于棉菜籽粕蛋白較高，最高使用量不要超過(guò)禽畜日糧飼喂量的40%（濕料重量）。如果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵飼料過(guò)酸適口性變差，可在飼喂前在陽(yáng)光下曬1-2小時(shí)，或添加適量的碳酸氫鈉（小蘇打）即可改善。

發(fā)酵過(guò)程中與發(fā)酵后使用過(guò)程中，發(fā)酵的容器要一直保持密封狀態(tài)，可以長(zhǎng)時(shí)間保存（一年左右）。

當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)成本高居不下，而飼料成本是其中最高的，利用廉價(jià)原料發(fā)酵飼料（包括一些輕度發(fā)霉的粕類低價(jià)收回）是極佳解決辦法。通過(guò)微生物飼料發(fā)酵劑的發(fā)酵作用，可以將輕度霉變飼料變成優(yōu)質(zhì)飼料，將不易消化的物質(zhì)分解為可被畜禽吸收的小分子糖類、氨基酸等。同時(shí)發(fā)酵飼料中富含有益微生物、酶制劑、酸化劑等，可調(diào)節(jié)畜禽腸胃微生態(tài)環(huán)境并進(jìn)一步提高飼料利用率。發(fā)酵飼料氣味清香，提高了飼料的適口性，加上發(fā)酵飼料中有大約4℃的酒度，能夠促進(jìn)動(dòng)物新陳代謝促進(jìn)健康抵御疾病，是當(dāng)前養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展中重要的一環(huán)。

本技術(shù)也可以同樣發(fā)酵菜籽粕（餅）、棕櫚粕等，方法同上。

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2020年已全面禁抗，我們之前經(jīng)常在飼料中添加的抗生素進(jìn)行促生長(zhǎng)行為將是違法，否則面臨巨額罰單。如何既能夠促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)又能夠形成無(wú)抗養(yǎng)殖呢？其實(shí)中草藥在促進(jìn)畜禽養(yǎng)殖健康和生長(zhǎng)、改善肉蛋奶品質(zhì)大有可為，特別是將中草藥發(fā)酵后效果提升4-28倍等好處，這個(gè)實(shí)施方案比你想象中效果更好，運(yùn)用的沒(méi)有不被效果折服的，值得嘗試驗(yàn)證

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